Blog

I. Arka Plan ve Amaç

Mikroalgler, tipik bir mikrobiyal örnek sınıfı olarak, nükleik asit ve protein ekstraksiyon çalışmalarında önemli bir rol oynamaktadır. Bununla birlikte, yoğun hücre duvarı yapıları ve yüksek mekanik dayanıklılıkları nedeniyle, geleneksel parçalama yöntemleri genellikle tam hücre lizisine ulaşamamakta ve bu da sonraki DNA, RNA ve protein ekstraksiyonunun verimini ve konsantrasyonunu doğrudan etkilemektedir.

Bu deneyde, örnek sıvı mikroalg süspansiyonundan oluşmuştur. RNA bozulmasını ve protein denatürasyonunu önlemek için düşük sıcaklık koşullarında etkili hücre parçalanması gerekiyordu. Geleneksel ultrasonik parçalama, uzun süreli işlemden sonra bile sınırlı etkinlik göstermiş ve hızlı sıcaklık artışı, düşük verimlilik ve zayıf tekrarlanabilirlik ile ilişkilendirilmiştir.

Çeşitli örnek hazırlama yöntemleri karşılaştırıldıktan sonra, Welso Tam Otomatik Yüksek Hızlı Doku Öğütücü seçilmiştir. Yüksek frekanslı mekanik salınımı kriyojenik uyumlu çalışma ile birleştirerek, sistem sert mikroalg hücre duvarlarının verimli ve istikrarlı bir şekilde parçalanmasını sağlayarak, yüksek kaliteli nükleik asit ve protein ekstraksiyonu için ideal bir ön işlem çözümü sunmaktadır.

II. Cihaz

Welso Tam Otomatik Yüksek Hızlı Doku Öğütücü

Bu cihaz, yüksek frekanslı salınım, toplu işlem yeteneği ve mükemmel düşük sıcaklık uyumluluğu özelliklerine sahiptir. Mikroorganizmaların, bitki dokularının ve diğer yüksek sertlikteki numunelerin hızlı ve homojen bir şekilde homojenleştirilmesi için uygundur.

III. Malzemeler ve Yapılandırma

2 mL × 24 pozisyonlu metal adaptör × 1 set

2 mL öğütme tüpleri

Zirkonya Öğütme Boncukları (çoklu boyut kombinasyonu):

0,1 mm

0,5 mm

1 mm

2 mm

IV. Deneysel Prosedür

1. Adaptörün Ön Soğutulması

Kullanımdan önce metal adaptörü 5 dakika boyunca -80 °C'lik bir dondurucuya yerleştirin.

Sık yapılan deneyler için, adaptör bir sonraki işlemi kolaylaştırmak amacıyla kullanımdan sonra doğrudan -20 °C'lik bir dondurucuda saklanabilir.

2. Numune Hazırlama

Uygun miktarda mikroalg süspansiyonunu 2 mL'lik bir öğütme tüpüne aktarın. Numune özelliklerine göre farklı boyutlarda uygun bir zirkonya boncuk kombinasyonu ekleyin, ardından tüp kapağını sıkıca kapatın.

3. Numune Yükleme

Önceden soğutulmuş metal adaptörü öğütücü miline takın ve adaptör tabanının tahrik mili yuvasına tam olarak oturduğundan emin olun.

Uygun dengeyi sağlamak için öğütme tüplerini adaptöre simetrik ve eşit şekilde yerleştirin.

4. Adaptör Sabitleme

Adaptörü basınç kapağıyla kapatın ve sabitleme somununu sıkın, adaptörün yatay konumda kalmasını sağlayın.

5. Parametre Ayarı ve Öğütme

Frekans: 70 Hz

Öğütme süresi: 60 s

Aralık süresi: 20 s

Çevrim sayısı: 4

Parametreler, mikroalg türüne, numune hacmine ve deneysel gereksinimlere göre ayarlanabilir.

Ayarlar onaylandıktan sonra, öğütme programını başlatın.

6. Numune Toplama

İşlem tamamlandıktan sonra, cihazı açın ve öğütme tüplerini çıkarın. Numuneler daha sonra doğrudan nükleik asit veya protein ekstraksiyonu için hazırdır.

V. Notlar

Farklı mikroalg türleri hücre duvarı bileşimi ve mekanik dayanıklılık bakımından farklılık gösterir. Optimum parçalama verimliliğine ulaşmak için boncuk boyutu kombinasyonlarının ve çalışma parametrelerinin optimize edilmesi önerilir.

Öğütme tüpleri, uygun dengeyi sağlamak ve öğütme performansını ve cihaz stabilitesini etkileyebilecek dengesiz yüklemeyi önlemek için simetrik olarak yüklenmelidir.

Parametre seçimi belirsiz ise, kullanıcılar profesyonel rehberlik için Welso teknik destek veya satış temsilcilerine danışabilirler.

VI. Performans Değerlendirmesi

Mikroskopik gözlem, Welso Tam Otomatik Yüksek Hızlı Doku Öğütücüsü ile 240 saniyelik işlemden sonra mikroalg hücre yapılarının tamamen parçalandığını, hücre duvarlarının neredeyse tamamen lizize uğradığını ve numune homojenliğinin önemli ölçüde iyileştiğini göstermiştir.

Geleneksel ultrasonik parçalama yöntemleriyle karşılaştırıldığında, bu yaklaşım şunları göstermektedir:

✔ Daha yüksek parçalama verimliliği

✔ İşlem süresinde önemli ölçüde azalma

✔ Düşük sıcaklık koşullarında iyileştirilmiş tekrarlanabilirlik

✔ Toplu numune işleme için üstün uygunluk

Bu çözüm, mikroalg işlemede karşılaşılan "zor hücre duvarı parçalanması ve hızlı sıcaklık artışı" gibi teknik zorlukların üstesinden etkili bir şekilde gelir. Yüksek kaliteli nükleik asit ve protein ekstraksiyonu için güvenilir bir ön işlem yöntemi sağlayarak laboratuvar verimliliğini büyük ölçüde artırır ve mikroalgler ile diğer yüksek dirençli mikrobiyal örnekler için ideal bir seçimdir.